細菌鑒定的酶類試驗是細菌的生化反應中酶類的存在與否等生化特性,這些反應能夠導致反應體系的PH值變化或產生顯色物質,加入合適的酸堿指示劑或顯色劑就可以反映出來。
氧化酶試驗
氧化酶(細胞色素氧化酶)是細胞色素呼吸酶系統的最終呼吸酶。具有氧化酶的細菌,首先使細胞se素C氧化,再由氧化的細胞se色素C使對苯二胺氧化,生成有色的醌類化合物。
試驗方法
1)菌落法:直接滴加氧化酶試劑于被檢菌菌落上;
2)濾紙法:取潔凈濾紙一小塊,蘸取菌少許,然后加氧化酶試劑;
3)試劑紙片法:將濾紙片浸泡于氧化酶試劑中制成試劑紙片,取菌涂于試劑紙上。
結果判讀
細菌在與試劑接觸10s內呈深紫色,為陽性。為保證結果的準確性,分別以銅綠假單胞菌和大腸埃希菌作為陽性和陰性對照。
臨床應用及意義
主要用于腸桿菌科細菌與假單胞菌的鑒別,前者為陰性,后者為陽性。奈瑟菌屬、莫拉菌屬細菌也呈陽性反應。此外,也用于假單胞菌屬與腸桿菌科細菌的區別,前者陽性,而后者陰性。產堿桿菌屬等均為陽性。
異常結果: 奈瑟菌屬有腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等9種致病菌,引起流行性腦脊髓膜炎
上呼吸道癥狀:鼻咽炎等全身感染癥狀:高熱、出血點或瘀血點,腦膜炎癥狀:頭痛、嘔吐、頸項強直;引起淋病,引起新生兒淋病性眼結膜炎。
觸酶試驗
觸酶又稱過氧化氫酶,具有過氧化氫酶的細菌,能催化過氧化氫成為水和原子態氧,繼而形成氧分子,出現氣泡。大多需氧和兼性厭氧菌均產生過氧化氫酶,但鏈球菌科陰性,故常用此試驗來鑒定。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗,結核分枝桿菌為陰性,戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。
試驗方法
取潔凈玻片1張,用接種環挑取細菌,加3%的H2O2 1滴,立即觀察結果。
結果判讀
若立即出現大量氣泡為陽性。無氣泡為陰性。
臨床應用及意義
大多需氧和兼性厭氧菌均產生過氧化氫酶,但鏈球菌科陰性,故常用此試驗來鑒定。此外,金氏桿菌屬的細菌也為陰性。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗,結核分枝桿菌為陰性,戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。
注意事項
?、?試驗時應避免接觸含鐵物質,以免出現假陽性。
② 10g/L鹽酸四甲基對苯二胺或10g/L鹽酸四甲基對苯二胺水溶液為無色溶液,在空氣中易被氧化而失效,故應經常更換新試劑,并盛于棕色瓶中,若試劑已變成深藍色,應棄去不用。